مەھسۇلاتلار
Lifecosm SARS-Cov-2-RT-PCR بايقاش زاپچاسلىرى 2019-nCoV
مۆلچەردىكى ئىشلىتىش
بۇ يۈرۈشلۈك يۇتقۇنچاق ، بۇرۇن يۇتقۇنچاق يەللىكى ، كانايچە يەل خالتىسى سۇيۇقلۇقى ، بەلغەم ئارقىلىق يېڭى تاجىسىمان ۋىرۇس (2019-nCoV) نى سۈپەتلىك بايقاشقا ئىشلىتىلىدۇ. بۇ مەھسۇلاتنىڭ بايقاش نەتىجىسى پەقەت كلىنىكىلىق پايدىلىنىش ئۈچۈنلا ئىشلىتىلىدۇ ، ئۇنى بىردىنبىر ئىشلىتىشكە بولمايدۇ. كلىنىكىلىق دىئاگنوز قويۇش ۋە داۋالاشنىڭ ئىسپاتى. بىمارنىڭ كلىنىكىلىق ئىپادىسى ۋە باشقا تەجرىبىخانا سىناقلىرى بىلەن بىرلەشتۈرۈپ كېسەللىك ئەھۋالىنى ئەتراپلىق تەھلىل قىلىش تەۋسىيە قىلىنىدۇ.
تەكشۈرۈش پرىنسىپى
بۇ يۈرۈشلۈك RT- PCR تېخنىكىسىنى ئاساس قىلغان.ئەمەلىيەتتە ، 2019-يىلدىكى يېڭى تاجىسىمان ۋىرۇس (2019-nCoV) ORF1ab ۋە N گېنى كېڭەيتىش نىشان رايونى قىلىپ تاللانغان.كونكېرت پىرىمېرلار ۋە فلۇئورېسسېنسىيە تەكشۈرۈش ئەسۋابى (N گېن تەكشۈرۈش ئەسۋابىغا FAM ، ORF1ab تەكشۈرۈش ئەسۋابى HEX دەپ يېزىلغان) ئەۋرىشكە ئىچىدىكى 2019-يىللىق يېڭى تىپتىكى تاجىسىمان ۋىرۇس RNA نى بايقاش ئۈچۈن لايىھەلەنگەن.بۇ زاپچاس يەنە ئىچكى مەنبەلىك كونترول كونترول سىستېمىسى (CY5 دەپ بەلگە قويۇلغان ئىچكى كونترول گېن تەكشۈرۈش ئەسۋابى) نى ئۆز ئىچىگە ئالغان بولۇپ ، ئەۋرىشكە يىغىش ، RNA ۋە PCR كېڭەيتىش جەريانىنى نازارەت قىلىدۇ ، بۇ ئارقىلىق يالغان پاسسىپ نەتىجىلەرنى ئازايتىدۇ.
ئاساسلىق زاپچاسلىرى
| زاپچاسلار | توم（48T / Kit） |
| RT-PCR ئىنكاس ھەل قىلىش چارىسى | 96µl |
| nCOV primer TaqMan probemixture （ORF1ab, N Gene, RnaseP Gene） | 864µl |
| سەلبىي كونترول | 1500µl |
| nCOV ئاكتىپ تالاش-تارتىش OR l ORF1ab N Gene） | 1500µl |
ئۆزىنىڭ رېئاكتورى: RNA ئېلىش ياكى ساپلاشتۇرۇش رېئاكتورى.سەلبىي / مۇسبەت كونترول: مۇسبەت كونترول بولسا RNA بولسا نىشان بۆلەكنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ ، مەنپىي كونترول بولسا يادرو كىسلاتاسى يوق سۇ.ئىشلىتىش جەريانىدا ، ئۇلار ئېلىشقا قاتنىشىشى ھەمدە يۇقۇملۇق دەپ قارىلىشى كېرەك.ئۇلارنى ئالاقىدار بەلگىلىمە بويىچە بىر تەرەپ قىلىش ۋە بىر تەرەپ قىلىش كېرەك.
ئىچكى پايدىلىنىش گېنى ئىنسانلارنىڭ RnaseP گېنى.
ساقلاش شارائىتى ۋە مۇددىتى توشقان ۋاقىت
-20 ± 5 ℃ ، قايتا-قايتا توڭلىتىش ۋە ئېرىتىشتىن 5 قېتىمدىن ساقلىنىڭ ، 6 ئاي كۈچكە ئىگە.
قوللىنىشچان ئەسۋاب
FAM / HEX / CY5 ۋە باشقا كۆپ يوللۇق فلۇئورېسسېنسىيە PCR ئەسۋابى بىلەن.
تەلەپ تەلىپى
1. قوللىنىشچان ئەۋرىشكە تۈرلىرى ： كېكىردەك يەللىكى ، بۇرۇن يۇتقۇنچاق يەللىكى ، كانايچە يەل خالتىسى سۇيۇقلۇقى ، بەلغەم。
2. ئالاھىدە توپلاش (ئاسېپتىك تېخنىكا）
يۇتقۇنچاق يەللىكى: دانىخورەك ۋە ئارقا يۇتقۇنچاق دىۋارىنى بىرلا ۋاقىتتا ئىككى لۆڭگە بىلەن سۈرتۈڭ ، ئاندىن ئەۋرىشكە ئېرىتمىسى بار سىناق نەيچىسىگە پاتقاق بېشىنى چىلاپ قويۇڭ.
بەلغەم: بىمار چوڭقۇر يۆتىلىپ بولغاندىن كېيىن ، ئەۋرىشكە ئېرىتمىسى بار بۇرمىلاش دورىسى سىناق نەيچىسىدە يۆتەل بەلغەمنى يىغىڭ.كانايچە تاياقچە باكتېرىيە سۇيۇقلۇقى medical تېببىي خادىملارنىڭ ئەۋرىشكىسى.3. ئەۋرىشكىنى ساقلاش ۋە توشۇش
ۋىرۇسنى ئايرىۋېتىش ۋە RNA سىنىقىنىڭ ئەۋرىشكىسىنى بالدۇرراق سىناق قىلىش كېرەك.24 سائەت ئىچىدە بايقىغىلى بولىدىغان ئەۋرىشكىلەرنى 4 at ساقلىغىلى بولىدۇ.24 ئىچىدە بايقىغىلى بولمايدىغانلار
سائەتنى -70 at ياكى ئۇنىڭدىن تۆۋەن ساقلاش كېرەك (ئەگەر ساقلاش شارائىتى -70 if بولمىسا ، ئۇلار بولۇشى كېرەك
-20 ℃ توڭلاتقۇدا ۋاقىتلىق ساقلىنىدۇ).ئەۋرىشكە توشۇش جەريانىدا قايتا-قايتا مۇزلاش ۋە ئېرىتىشتىن ساقلىنىشى كېرەك.ئەۋرىشكە يىغىپ بولغاندىن كېيىن تېزرەك تەجرىبىخانىغا ئەۋەتىش كېرەك.ئەگەر ئەۋرىشكىلەرنى ئۇزۇن ئارىلىققا توشۇشقا توغرا كەلسە ، قۇرۇق مۇز ساقلاش تەۋسىيە قىلىنىدۇ.
سىناق ئۇسۇللىرى
1 ئەۋرىشكە پىششىقلاپ ئىشلەش ۋە RNA ئېلىش (ئەۋرىشكە بىر تەرەپ قىلىش رايونى)
RNA ئېلىش ئۈچۈن 200μl سۇيۇق ئەۋرىشكە ئېلىش تەۋسىيە قىلىنىدۇ.مۇناسىۋەتلىك ئېلىش باسقۇچلىرى ئۈچۈن سودا RNA ئېلىش زاپچاسلىرىنىڭ كۆرسەتمىسىنى كۆرۈڭ.سەلبىي ۋە سەلبىي
بۇ زاپچاستىكى كونتروللار ئېلىشقا قاتناشقان.
2 PCR رېئاكتور تەييارلىقى (رېئاكتور تەييارلاش رايونى)
2.1 زاپچاس ۋە ئېرىتىشتىكى بارلىق زاپچاسلارنى ئېلىڭ ھەمدە ئۆي تېمپېراتۇرىسىدا ئارىلاشتۇرۇڭ.Centrifuge 8000 rpm دە بىر نەچچە سېكۇنت ئىشلىتىشتىن بۇرۇنلازىملىق مىقداردىكى رېئاكتورنى ھېسابلاڭ ، تۆۋەندىكى جەدۋەلدە كۆرسىتىلگەندەك ئىنكاس سىستېمىسى تەييارلاندى:
| زاپچاسلار | N مۇلازىمىتى (25µl سىستېمىسى) |
| nCOV primer TaqMan probemixture | 18 µl × N. |
| RT-PCR ئىنكاس ھەل قىلىش چارىسى | 2 µl × N. |
| * N = سىناق قىلىنغان ئەۋرىشكە سانى + 1 (مەنپىي كونترول) + 1 (nCOVئاكتىپ كونترول) | |
2.2 زاپچاسلارنى ئوبدان ئارىلاشتۇرغاندىن كېيىن ، سېنترىفۇگ قىسقا ۋاقىت ئىچىدە تۇرۇبا دىۋارىدىكى بارلىق سۇيۇقلۇقلارنىڭ نەيچىنىڭ ئاستىغا چۈشۈپ كېتىشى ، ئاندىن 20 µl كۈچەيتىش سىستېمىسىنى PCR تۇرۇبىسىغا توغرىلاڭ.
3 ئەۋرىشكە ئېلىش (ئەۋرىشكە تەييارلاش رايونى)
ئېلىنغاندىن كېيىن مەنپىي ۋە ئاكتىپ كونتروللارنىڭ 5μl نى قوشۇڭ.سىناق قىلىنىدىغان ئەۋرىشكىنىڭ RNA PCR رېئاكسىيە تۇرۇبىسىغا قوشۇلدى.
كۈچەيتكۈچنى تەكشۈرۈش رايونىغا يۆتكەشتىن بۇرۇن تۇرۇبىنى مەھكەم ۋە مەركەزدىن قاچۇرۇش 8000 rpm دا بىر نەچچە سېكۇنت تۇرغۇزۇڭ.
4 PCR كۈچەيتكۈچ (كۈچەيتىلگەن بايقاش رايونى)
4.1 رېئاكسىيە تۇرۇبىسىنى ئەسۋابنىڭ ئەۋرىشكە ھۈجەيرىسىگە قويۇڭ ، پارامېتىرلارنى تۆۋەندىكىدەك بەلگىلەڭ:
| باسقۇچ | دەۋرىيلىك سان | تېمپېراتۇرا(° C) | ۋاقىت | collectionبېكەت |
| تەتۈرtranscription | 1 | 42 | 10min | - |
| ئالدىن كېلىشىشn | 1 | 95 | 1min | - |
| دەۋرىيلىك | 45 | 95 | 15s | - |
| 60 | 30s | سانلىق مەلۇمات توپلاش |
ئەسۋابلارنى بايقاش قانىلى تاللاش: فلۇئورېسسېنسىيە سىگنالى ئۈچۈن FAM 、 HEX 、 CY5 قانىلىنى تاللاڭ.پايدىلىنىش فلۇئورېسسېنسىيەسى يوق ، ROX نى تاللىماڭ.
5 نەتىجىنى ئانالىز قىلىش (تەڭشەش ئۈچۈن ھەر بىر قورالنىڭ تەجرىبە كۆرسەتمىسىنى كۆرۈڭ)
ئىنكاستىن كېيىن ، نەتىجىنى تېجەڭ.تەھلىل قىلىنغاندىن كېيىن ، رەسىمگە ئاساسەن ئاساسىي قىممەتنىڭ باشلىنىش قىممىتى ، ئاخىرلىشىش قىممىتى ۋە چەكلىمە قىممىتىنى تەڭشەڭ (ئىشلەتكۈچى ئەمەلىي ئەھۋالغا ئاساسەن تەڭشىيەلەيدۇ ، باشلىنىش قىممىتىنى 3 ~ 15 قىلىپ تەڭشىگىلى بولىدۇ ، ئاخىرلىشىش قىممىتىنى تەڭشىگىلى بولىدۇ) 5 ~ 20 ، تەڭشەش) لوگارىزىم گرافىكىدىكى كۆزنەكنىڭ بوسۇغىسىدا ، بوسۇغا سىزىقى لوگارىزىم باسقۇچىدا ، مەنپىي كونترولنىڭ كۈچەيتمە ئەگرى سىزىقى تۈز سىزىق ياكى چەك سىزىقىنىڭ ئاستىدا).
6 Quauty كونترول proced تەرتىپلىك كونترول سىناققا كىرىدۇ） سەلبىي كونترول: FAM ، HEX ، CY5 بايقاش قانىلىنىڭ ئېنىق كۈچەيتمە ئەگرى سىزىقى يوق
COV مۇسبەت كونترول: FAM ۋە HEX بايقاش قانىلىنىڭ ئېنىق كۈچەيتىلگەن ئەگرى سىزىقى ، Ct قىممىتى 32 ، ئەمما CY5 قانىلىنىڭ كېڭەيتىش ئەگرى سىزىقى يوق.
ئوخشاش سىناقتا يۇقارقى تەلەپلەر بىرلا ۋاقىتتا قاندۇرۇلۇشى كېرەكبولمىسا ، سىناق ئىناۋەتسىز ، ئۇنى قايتا-قايتا قىلىشقا توغرا كېلىدۇ.
7 نەتىجىنى ئېنىقلاش.
7.1 ئەگەر سىناق ئەۋرىشكىسىنىڭ FAM ۋە HEX قاناللىرىدا كۈچەيتمە ئەگرى سىزىق ياكى Ct قىممىتى> 40 بولمىسا ، CY5 قانىلىدا كۈچەيتمە ئەگرى سىزىق بولسا ، 2019-يىلدىكى يېڭى تاجىسىمان ۋىرۇس (2019-nCoV) يوق دەپ ھۆكۈم قىلىشقا بولىدۇ. ئەۋرىشكە RNA;
.2 ئەگەر سىناق ئەۋرىشكىسىدە FAM ۋە HEX قاناللىرىدا ئېنىق كۈچەيتىش ئەگرى سىزىقى بولسا ، Ct قىممىتى 40 فوندستېرلىڭ بولسا ، بۇ ئەۋرىشكىنىڭ 2019-يىلدىكى يېڭى تاجىسىمان ۋىرۇس (2019-nCoV) ئۈچۈن مۇسبەت ئىكەنلىكىگە ھۆكۈم قىلىشقا بولىدۇ.
7.3 ئەگەر سىناق ئەۋرىشكىسىدە پەقەت FAM ياكى HEX نىڭ بىر قانىلىدا ئېنىق كۈچەيتىش ئەگرى سىزىقى بولسا ، Ct قىممىتى ≤40 بولسا ، باشقا قانالدا كۈچەيتمە ئەگرى سىزىق بولمىسا ، نەتىجىنى قايتا تەكشۈرۈشكە توغرا كېلىدۇ.ئەگەر قايتا تەكشۈرۈش نەتىجىسى بىردەك بولسا ، ئەۋرىشكىنى يېڭىغا ئىجابىي دەپ ھۆكۈم قىلىشقا بولىدۇ
تاجىسىمان ۋىرۇس 2019 (2019-nCoV).ئەگەر قايتا تەكشۈرۈش نەتىجىسى مەنپىي بولسا ، ئەۋرىشكە 2019-يىلدىكى يېڭى تاجىسىمان ۋىرۇس (2019-nCoV) ئۈچۈن مەنپىي دەپ ھۆكۈم قىلىشقا بولىدۇ.
ئىجابىي ھۆكۈم قىممىتى
ROC ئەگمە ئۇسۇلى بۇ يۈرۈشلۈك زاپچاسنىڭ پايدىلىنىش CT قىممىتىنى ، ئىچكى كونترول پايدىلىنىش قىممىتى 40 نى ئېنىقلاشقا ئىشلىتىلىدۇ.
سىناق نەتىجىسىنى ئىزاھلاش
1. ھەر بىر سىناقتا سەلبىي ۋە ئاكتىپ كونتروللارنى سىناش كېرەك.سىناق نەتىجىسىنى كونترول قىلىش سۈپەت كونترول تەلىپىگە يەتكەندىلا ئاندىن بەلگىلىگىلى بولىدۇ
2. FAM ۋە HEX بايقاش قاناللىرى مۇسبەت بولغاندا ، سىستېما رىقابىتى سەۋەبىدىن CY5 قانىلى (ئىچكى كونترول قانىلى) نىڭ نەتىجىسى پاسسىپ بولۇشى مۇمكىن.
3. ئىچكى كونترول نەتىجىسى مەنپىي بولغاندا ، ئەگەر سىناق نەيچىسىنىڭ FAM ۋە HEX بايقاش يوللىرىمۇ مەنپىي بولسا ، بۇ سىستېمىنىڭ چەكلەنگەنلىكى ياكى مەشغۇلاتنىڭ خاتا ئىكەنلىكىدىن دېرەك بېرىدۇ ، t سىناق ئىناۋەتسىز.شۇڭلاشقا ، ئەۋرىشكىلەرنى قايتا تەكشۈرۈش كېرەك.
